周密的實驗設(shè)置方案，以及成像前對細胞的優(yōu)化、可重復(fù)的處理，是顯微鏡實驗成功的關(guān)鍵。為此，必須考慮幾個因素，這些因素取決于顯微鏡方法和所使用的一般設(shè)置：

? 容器幾何形狀

? 基材、表面和涂層

? 無菌和可繁殖細胞處理

? 活細胞和健康細胞

? 滿足顯微鏡的光學(xué)要求

? 可選：滿足活細胞成像要求

實驗方案的關(guān)鍵問題是什么？

如何為您的實驗和顯微鏡技術(shù)選擇*佳幾何形狀的實驗器皿？

存在多種細胞培養(yǎng)容器以滿足不同細胞培養(yǎng)測定的復(fù)雜性，例如使用懸浮或粘附細胞的實驗、2D或3D測定、單培養(yǎng)或共培養(yǎng)測定等等。主要培養(yǎng)容器的幾何形狀（如生長面積和體積）是影響實驗結(jié)果和解釋的重要因素，在開始之前應(yīng)仔細考慮。此外，容器幾何形狀影響實驗中的物理（例如蒸發(fā)）和光學(xué)（例如彎液面效應(yīng)）特性。

ibidi的解決方案

ibidi提供各種幾何形狀的成像小室，專門為您的實驗量身定制。了解

更多詳情請點擊查看“The Geometry of the ibidi Chambers”.

您為您的特定細胞類型和顯微鏡方法選擇了合適的基底、表面和涂層了嗎？

細胞的培養(yǎng)、生長、發(fā)育和信號傳導(dǎo)強烈依賴于用于細胞培養(yǎng)的表面。此外，光學(xué)規(guī)格要求強烈決定了哪種基底是可取的。硼硅酸鹽玻璃被廣泛用作基底，然而，涂層可能是支持細胞粘附所必需的。聚合物的使用也非常普遍。它們通常經(jīng)過組織培養(yǎng)處理，使得細胞能直接粘附；然而，并非市場上所有可用的聚合物都適用于顯微鏡。ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底部的實驗器皿為各種高分辨率顯微鏡應(yīng)用提供了*優(yōu)的光學(xué)性能。

然而，如果細胞表面需要特定的細胞外基質(zhì)（ECM），則可以使用涂層，例如膠原I、膠原IV或聚-L-賴氨酸。對于懸浮細胞或球體培養(yǎng)，則應(yīng)使用非粘附表面，如ibidi Bioinert生物惰性表面。

此外，還需要考慮是進行2D還是3D實驗。有關(guān)更多詳細信息，請點擊查看3D Cell Culture Assays。

ibidi的解決方案

ibidi Labware耗材

ibidi μ-Slides, μ-Dishes, and μ-Plates的突出特點是其超薄的蓋玻片底部，非常適合**顯微鏡應(yīng)用。ibidi提供 ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的實驗器皿；也提供具有各種表面和涂層的成像小室，例如用于直接培養(yǎng)貼壁細胞的ibiTreat (tissue culture-treated) ibiTreat（組織培養(yǎng)處理的）表面。有關(guān)更多詳細信息，請點擊查看“Surfaces and Coatings”。

Non-Adherent Bioinert Surface非貼壁生物惰性表面

生物惰性是一種穩(wěn)定、生物惰性的表面，用于在沒有任何細胞或生物分子粘附的非粘附表面上對類器官、球體和懸浮細胞進行長期培養(yǎng)和高分辨率顯微鏡觀察。目前有 μ-Dish?35^{mm, high} Bioinert。

Micropatterning微圖案

ibidi μ-Patterning technology實現(xiàn)了各種2D和3D細胞培養(yǎng)應(yīng)用的空間定義的細胞粘附。小型化的粘合劑圖案（例如，線、正方形或點）不可逆地印刷在ibidi Polymer Coverslip的非粘性生物惰性表面上，從而實現(xiàn)**控制的細胞粘附。

有關(guān)ibidi μ-Patterning技術(shù)產(chǎn)品μ-Pattern Slides更多詳情細信息，請點擊查看“μ-Patterning technology”。

您能確保細胞在培養(yǎng)過程中以及整個成像過程中都是健康的嗎?

顯微鏡可以做活細胞和固定細胞，這取決于實驗設(shè)置和所需的讀數(shù)。在活細胞中，顯微鏡檢查過程會造成壓力。細胞必須從培養(yǎng)箱中取出，這導(dǎo)致周圍溫度和濕度的降低。此外，細胞暴露在光下一段時間，這可能會導(dǎo)致光毒性。一般來說，所有的顯微鏡步驟都應(yīng)該盡可能快地進行，同時保持精度，以*大限度地減少細胞壓力。

因此，任何成像實驗都只能使用有活力和健康的細胞。為了確保這一點，應(yīng)每天在顯微鏡下控制細胞附著、形態(tài)、融合、營養(yǎng)供應(yīng)和污染跡象。此外，一些參數(shù)，如溫度和濕度，必須保持一致。

人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)在μ-Slide 4孔中的**熒光

您能確保您選擇的顯微鏡技術(shù)的光學(xué)要求得到滿足嗎?

每種顯微鏡技術(shù)對底材和細胞預(yù)處理都有自己的特殊要求，在計劃實驗時應(yīng)考慮這些要求。有關(guān)不同襯底的光學(xué)參數(shù)的更詳細信息更多詳情細信息，請點擊查看"Microscopy Parameters of Materials" and "Comparison of Material Specifications".

此外，在開始顯微鏡檢查之前，有一些一般的建議:

·為了防止在容器內(nèi)形成氣泡，所有介質(zhì)都應(yīng)保持平衡。通通過*小化溫差，可以避免可能嚴重干擾顯微鏡的外部對流。

·在進行熒光顯微鏡檢查時，*大限度地減少激發(fā)光引起的細胞應(yīng)激尤為重要，因為這可能會改變實驗的結(jié)果。

·此外，細胞培養(yǎng)血管或培養(yǎng)基的自發(fā)熒光可能是不想要的副作用。因此，熒光顯微鏡應(yīng)該應(yīng)用具有低自發(fā)熒光的專門細胞培養(yǎng)容器。

ibidi的解決方案

許多顯微鏡技術(shù)，如相位對比、寬場熒光和共聚焦顯微鏡，都可以不受限制地使用任何具有ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的ibidi實驗器皿。

當計劃一個活細胞成像實驗時，您的設(shè)置是否滿足所有必要的要求?

如果連續(xù)或在特定時間點需要多個圖像，那么活細胞成像可能是您的*佳選擇。為了在活細胞成像實驗中保持細胞的存活和健康，必須在顯微鏡上建立和維持生理條件——與培養(yǎng)箱內(nèi)的設(shè)置相同。

ibidi的解決方案

ibidi Stage Top Incubation Systems 孵育系統(tǒng)可用于載玻片/培養(yǎng)皿和多孔板。它允許在任何倒置顯微鏡上進行短期和長期分析期間準確可靠地控制重要的活細胞成像參數(shù)（溫度、CO2和O2濃度以及相對濕度）。如果需要額外控制氧氣水平（例如，在缺氧實驗中），ibidi Stage Top Incubation Systems, CO2/O2 孵育系統(tǒng)是理想的解決方案。